Epidemiology of canine visceral leishmaniasis in a vulnerable region in Brazil / Soroepidemiologia da leishmaniose visceral canina em uma região vulnerável do Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.

Natural canine infection by Leishmania infantum and Leishmania amazonensis and their implications for disease control / Infecção natural por Leishmania infantum e Leishmania amazonensis e suas implicações para o controle da doença

Abstract Leishmaniasis is a major public health problem worldwide. Because Leishmania can adapt to new hosts or vectors, knowledge concerning the current etiological agent in dogs is important in endemic areas. This study aimed to identify the Leishmania species detected in 103 samples of peripheral blood from dogs that were naturally infected with these protozoa. The diagnosis of leishmaniasis was determined through parasitological examination, the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the polymerase chain reaction (PCR). The Leishmania species were identified by means of PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The samples were subjected to PCR using oligonucleotide primers that amplify the intergenic region ITS1 of the rRNA gene in order to identify the species. The amplified DNA was digested using the restriction enzyme HaeIII. A restriction profile identical to L. amazonensis was shown in 77/103 samples and the profile was similar to L. infantum in 17/103. However, a mixed profile was shown in 9/103 samples, which impeded species identification. In conclusion, the infection in these dogs was predominantly due to L. amazonensis, thus indicating that diagnosing of cases of canine leishmaniasis needs to be reexamined, since the causative agent identified is not restricted to L. infantum.

Resumo Leishmaniose é um grande problema de saúde pública global. Devido à adaptação de Leishmania a novos hospedeiros ou vetores, conhecimentos sobre o agente etiológico atual em cães é importante em áreas endêmicas. Este estudo teve como objetivo identificar as espécies de Leishmania detectadas em 103 amostras de sangue periférico de cães naturalmente infectados com este protozoário. O diagnóstico de leishmaniose foi determinado por exame parasitológico, ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). A identificação das espécies de Leishmania foi realizada por PCR – seguido da análise do polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). As amostras foram submetidas a PCR utilizando-se iniciadores oligonucleotídicos que amplificam a região intergénica ITS1 do gene de rRNA para identificar as espécies, o DNA amplificado foi digerido com a enzima de restrição HaeIII. Observou-se que 77/103 amostras mostraram um perfil de restrição idênticos a L. amazonensis, 17/103 foram semelhantes para L. infantum; 09/103 mostraram um perfil misto, o que impediu a identificação da espécie. Em conclusão, a infecção nestes cães era predominantemente devido a L. amazonensis, indicando que o diagnóstico de casos de leishmaniose canina precisa ser reexaminada, já que o agente causador não está restrito a L. infantum.

Identification of Leishmania spp. promastigotes in the intestines, ovaries, and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus actively infesting dogs

Sand flies are recognized as the major vector of canine visceral leishmaniasis. However, in some areas of Brazil where sand flies do not occur, this disease is found in humans and dogs. There has been speculation that ticks might play a role in transmission of canine visceral leishmaniasis and the DNA of Leishmania spp. has been reported in whole ticks. We investigated the presence of Leishmania spp. promastigotes in the intestines, ovaries, and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks collected from tick-infested dogs in two cities of Brazil. We used 66 dogs that tested positive and 33 that tested negative for Leishmania spp. according to direct cytological examination assays. Ten ticks were collected from each dog and dissected to collect the intestines, ovaries, and salivary glands for immunohistochemistry (IHC) and diagnostic real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). IHC results showed Leishmania spp. in 98, 14, and 8 % of the intestines, ovaries, and salivary glands, respectively. Real-time PCR showed that 89, 41, and 33 % of the tick intestine, ovary, and salivary glands, respectively, were positive for Leishmania spp. The verification of promastigotes of Leishmania spp. by two independent techniques in ticks collected from these urban region dogs showed that there is need for clarification of the role of ticks in the transmission of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Serological, parasitological and molecular tests for canine visceral leishmaniosis diagnosis in a longitudinal study / Testes sorológicos, parasitológicos e moleculares para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em estudo longitudinal

Abstract One of the measures to control visceral leishmaniosis (VL) in Brazil is the identification and culling of the canine reservoir. There is much controversy concerning this strategy, including the proper identification of positive dogs and the fact that the host-parasite relationship changes over time make it more challenging. A dynamic cohort of 62 dogs was followed every three months using serological and parasitological examinations and PCR. Positivity by PCR was higher than by serology and by parasitological examinations and showed a tendency to decrease over time, while serology tended to increase after six months. Concomitant positivity in all tests was observed in 10.4% of the samples, and negativity in 29.1%. Overall sensitivity ranged from 43.6 to 64.1%, and was not uniform over time. The proportion of dogs with or without clinical signs was not different by cytology or PCR but PCR was able to identify a larger number of asymptomatic dogs compared to ELISA and immunochromatography. PCR can be useful for surveillance of areas where cases of canine VL have not yet been detected and in which control strategies can be implemented to limit the spread of the disease. Despite the advance in diagnostic tools CVL diagnosis remains a challenge.

Resumo Uma das medidas de controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se baseia na identificação e eliminação do reservatório canino. Existe considerável controvérsia relativa a esta estratégia incluindo a correta identificação dos cães positivos e a variação temporal da relação hospedeiro-parasita, o que torna esta medida ainda mais desafiadora. Uma coorte dinâmica de 62 cães foi acompanhada trimestralmente utilizando-se métodos sorológicos, parasitológicos e a PCR. A taxa de positividade por PCR foi maior em comparação à dos métodos sorológicos e parasitológicos, e mostrou tendência à diminuição com o passar do tempo, enquanto que a positividade sorológica apresentou tendência a aumento, após seis meses. Observou-se positividade concomitante em todos os testes em 10,4% das amostras e, negatividade concomitante, em 29,1%. A sensibilidade geral variou de 43,6% a 64,1%, não sendo uniforme ao longo do estudo. A proporção de cães com e sem sinais clínicos que foram positivos ao exame parasitológico ou à PCR não foi estatisticamente diferente. Contudo, foi possível identificar como positivos um maior número de animais assintomáticos por meio da técnica de PCR, em comparação aos testes ELISA e imunocromatográfico. A PCR pode ser bastante útil para a vigilância epidemiológica de áreas onde casos de LV canina ainda não tenham sido descritos e onde estratégias de controle podem ser implantadas para limitar a disseminação da doença. Não obstante o avanço nas ferramentas diagnósticas, diagnosticar a LVC continua um desafio.

Serological cross-reactivity of Trypanosoma cruzi, Ehrlichia canis, Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Babesia canis to Leishmania infantum chagasi tests in dogs

Introduction: The aim of this study was to evaluate the serological cross-reactivity between Leishmania sp. and other canine pathogens. Methods: Positive serum samples for Ehrlichia canis, Babesia canis, Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Trypanosoma cruzi were tested using three serological methods enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and Kalazar Detect™, for canine visceral leishmaniasis. Results: Of the 57 dog samples tested, 24 (42.1%) tested positive using one of the three serological methods: 10/57 (17.5%) for ELISA, 11/57 (19.3%) for IFAT and 3/57 (5.3%) for Kalazar Detect™. Conclusions: Our results demonstrated that the presence of other infectious agents may lead to cross-reactivity on leishmaniasis serological tests. .

Leishmania sp. infection in dogs from Florianópolis, Santa Catarina, SC, Brazil / Infecção por Leishmania sp. em cães de Florianópolis, Santa Catarina, SC, Brasil

The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania sp. infection in dogs (N = 491) living in the municipality of Florianópolis, Santa Catarina (SC), Brazil, which was considered a disease-free region for visceral leishmaniasis until 2011, when autochthonous cases of canine disease were notified. Seroprevalence in this population was assessed by ELISA (0.4%; 2/491) and IFAT (4.09%; 24/491). Only one dog exhibited seroreactivity in both serological methods, comprising a total of 25 (5.3%) seroreagent animals. Leishmania sp. DNA, obtained from a sample of whole blood of this animal, was amplified by both conventional and Real-Time PCR. Sequencing of the amplified DNA and, thereby, determination of the Leishmania species involved, was not possible. Our results suggest the necessity of a thorough epidemiological investigation in Florianópolis.

O objetivo do presente estudo foi pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania sp. em cães (N = 491) domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, considerada uma região indene para leishmaniose visceral até o ano de 2011, quando foram notificados casos autóctones da doença canina. A soroprevalência na população foi avaliada por ELISA (0,4%; 2/491) e RIFI (4,09%; 24/491). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos soro-lógicos, totalizando 25 (5,3%) animais sororeagentes. O DNA de Leishmania sp., obtido de uma amostra do sangue total desse animal, foi amplificado por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do DNA amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os nossos resultados sugerem a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa em Florianópolis.

Alterações eletromiográficas e histopatológicas da musculatura de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum / Muscular electromyographic and histopathologic changes in dogs naturally infected by Leishmania infantum

O objetivo do presente estudo foi avaliar as alterações eletromiográficas e histopatológicas de músculos estriados esqueléticos de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Foram selecionados 25 cães adultos, sem raça definida, com diagnósticos parasitológico, molecular e sorológico estabelecidos para a infecção. Os músculos avaliados foram: tríceps braquial, extensor carpo radial, bíceps femoral e gastrocnêmio. Um cão possuía problemas locomotores, com paresia de membros posteriores associada à intensa atrofia muscular. Vinte e três (92%) apresentavam algum tipo de alteração muscular, sendo que em 22 (88%) tais alterações foram identificadas diretamente pela eletromiografia. Mesmo sem sinais clínicos, em dez cães (40%) foram evidenciadas alterações eletromiográficas e histopatológicas. Antígenos de Leishmania foram identificados na musculatura de quatro (16%) cães. Os resultados eletromiográficos indicaram a ocorrência de polimiosite crônica em 13 (52%) cães, presença de músculos com inflamação tanto aguda quanto crônica em quatro (16%), miopatia aguda em dois (8%), e ausência de alterações eletromiográficas em três (12%). As alterações histopatológicas mais frequentemente observadas foram degeneração e necrose de miofibras e presença de infiltrado inflamatório verificadas em 12 (48%) cães. Outras alterações, quando comparado com as amostras de cães normais, foram do tamanho de grupos de fibras musculares em 15 (60%) e fibrose peri ou endomisial em 14 (56%) animais. As alterações observadas no presente estudo permitiram concluir que mesmo na ausência de sinais clínicos de comprometimento muscular, a maior parte dos cães infectados por L. infantum apresenta polimiosite crônica.

The aim of this study was to evaluate the electromyographic and histopathological changes in skeletal muscles of dogs naturally infected by L. infantum. Twenty five mixed breed adult dogs with parasitological, molecular and serological diagnosis were selected. The evaluated muscles were: triceps brachial, extensor carpi radialis, biceps femoris and gastrocnemius. One dog had locomotor clinical signs with hind limbs paresis associated with severe muscle atrophy. Twenty-three (92%) had some type of muscular change, and in 22 (88%) such changes were directly identified by electromyography. Even without any clinical signs of the disease, 10 (40%) dogs had electromyographic and histopathological changes. Leishmania antigens were detected in muscles of four (16%) dogs. The electromyographic evaluation indicated the occurrence of chronic polymyositis in 13 (52%) dogs, the presence of both acute and chronic muscle inflammation four (16%), acute myopathy in two (8%) and absence of electromyographic abnormalities in three (12%) dogs. The most frequently observed histopathological changes were degeneration and necrosis of myofibers and inflammatory infiltration observed in 12 (48%) dogs. Other changes were decreased diameter of muscle fibers in 15 (60%) and peri or endomysial fibrosis in 14 (56%) animals. The changes observed in the present study showed that even in the absence of clinical signs, most dogs infected by Leishmania infantum have chronic polymyositis.

Occurrence of Leishmania (Leishmania) chagasi in a domestic cat (Felis catus) in Andradina, São Paulo, Brazil: case report / Ocorrência de Leishmania (Leishmania) chagasi em gato doméstico (Felis catus) em Andradina, São Paulo, Brasil: relato de caso

This work describes natural infection by Leishmania in a domestic cat where amastigote forms of the parasite were observed in the popliteal lymph node imprint. Positive and negative serological reactions were observed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA), respectively. Polymerase chain reaction (PCR) revealed that the nucleotide sequence of the sample was identical to Leishmania (L.) chagasi. This is the first report of the disease in felines of the city of Andradina, SP, an area considered endemic for canine and human visceral leishmaniasis.

Neste trabalho, é relatada a infecção natural por Leishmania em um gato doméstico no qual, formas amastigotas do parasito foram observadas em imprint de linfonodo poplíteo. Reações sorológicas positivas e negativas foram observadas pelo teste de imunoadsorção enzimática (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), respectivamente. A reação em cadeia da polimerase (PCR) revelou que a sequência de nucleotídeos foi idêntica à Leishmania (L.) chagasi. Este é o primeiro relato da doença em felino da cidade de Andradina, Estado de São Paulo, Brasil, área considerada endêmica para leishmaniose visceral canina e humana.

Clinical and parasitological evaluation of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi submitted to treatment with meglumine antimoniate and allopurinol / Avaliação clínica e parasitológica de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi submetidos a tratamento com antimoniato de meglumina e alopurinol

Aiming to assess the efficacy of the treatment, to verify the occurrence of possible disease relapses and to search for the presence of parasites after the treatment, seven dogs naturally infected by Leishmania sp., were submitted to a treatment with meglumine antimoniate and allopurinol. For this, lymph node and bone marrow aspiration biopsies were carried out at seven moments. After the end of the six-month observation period all dogs were submitted to euthanasia. Then, spleen and liver “imprints” and in vitro cultures were carried out to search for amastigote forms of the parasite. All animals presented remission of the symptoms and during all the observation period no dog presented relapse of the disease, although amastigote forms of the parasite were observed in two of the animals at the end of the experiment. Thus, it was possible to conclude that the treatment promotes clinical healing but it does not eliminate the parasites completely.

Com objetivo de avaliar a eficácia do tratamento, verificar a ocorrência de possíveis recidivas da doença e pesquisar a presença de parasitas após a realização do tratamento, foram utilizados sete cães naturalmente infectados por Leishmania sp., submetidos a tratamento com antimoniato de meglumina e alopurinol. Para tanto, foram realizadas punções biópsias aspirativas de linfonodos e de medula óssea em sete momentos. Após o término dos seis meses de observação, todos os cães foram submetidos à eutanásia e realizados “imprints” e cultivo in vitro do baço e fígado para a pesquisa de formas amastigotas. Todos os animais apresentaram remissão dos sintomas e durante todo o período de observação nenhum cão apresentou recidiva da doença apesar de ter sido observada a presença de formas amastigotas do parasita em dois animais, ao término do experimento. Desta forma, foi possível concluir que o tratamento promove a cura clínica, entretanto não elimina completamente os parasitas.

Hematological evaluation of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi submitted to treatment with meglumine antimoniate / Avaliação hematológica de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi submetidos a tratamento com antimoniato de meglumina

The present research was carried out aiming to assess the hematological response of dogs with visceral leishmaniasis submitted to treatment. For this, seven animals naturally infected by Leishmania sp. were submitted to a treatment with 75 mg/kg meglumine antimoniate subcutaneously, 12-12h / 3 weeks. In all animals, a complete bloodcount and bone marrow aspiration biopsy were carried out for a descriptive evaluation at up to seven moments: before the treatment, 30, 60, 90, 120, 150 and 180 days after the start of the treatment. Before the beginning of the experiment hematological alterations were observed in four of the seven dogs (57.1%), among them, non regenerative anemia, lymphopenia, lymphocytosis and monocytosis. During the course of the experiment the occurrence of leukocytoses, such as left shift neutrophilia and eosinophilia, were observed in some of the animals. Before the beginning of the treatment (M1), the occurrence of erythrocytic hypoplasia was detected by bone marrow cytology in two of the dogs (28.6%). This was reversed through an increase in the amount of erythroid progenitor cells after the administration of meglumine antimoniate. Thus, it can be concluded that the treatment led to normalization of the hematological alterations and recovery of the bone marrow.

A presente pesquisa foi realizada com o objetivo de avaliar a resposta hematológica de cães com leishmaniose visceral submetidos a tratamento. Para tanto, sete animais naturalmente infectados porLeishmania sp. foram submetidos a um tratamento com 75 mg/kg de antimoniato de meglumina por via subcutânea, 12-12 h /3 semanas. Em todos os animais, uma contagem hematológica completa e punção biópsia aspirativa de medula óssea foi realizada para uma avaliação descritiva em até sete momentos: antes do tratamento, 30, 60, 90,120, 150 e 180 dias após o início do tratamento. Antes do início do experimento foram observadas alterações hematológicas em quatro dos sete cães (57,1%), entre eles, anemia não regenerativa, linfopenia, linfocitose e monocitose. Durante o curso do experimento a ocorrência de leucocitose, como neutrofilia com desvio à esquerda e eosinofilia foram observadas em alguns dos animais. Antes do início do tratamento (M1), a ocorrência de hipoplasia da série eritrocítica foi detectada pela citologia de medula óssea em dois animais (28,6%). Isto foi revertido por um aumento na quantidade de células eritróides progenitoras após a administração de antimoniato de meglumina. Desta forma, pode-se concluir que o tratamento promoveu anormalização das alterações hematológicas e recuperação da medula óssea.

Avaliação do proteinato sérico de cães com e sem sintomas neurológicos, naturalmente infectados por Leishmania chagasi / Evaluation of serum proteinogram of dogs naturally infected with Leishmania chagasi with and without neurological symptoms

A leishmaniose visceral é uma antropozoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania. A infecção no cão usualmente causa uma doença sistêmica crônica, que, clinicamente, é similar à humana. No Brasil, o Ministério da Saúde exige a eutanásia de animais portadores de leismaniose visceral e não recomenda o tratamento dos mesmos. Entretanto, em muitos países esses animais são tratados, e a avaliação da resposta à terapia baseia-se nos títulos de anticorpos anti-leishmania e no proteinograma sérico. O presente trabalho teve como objetivos determinar a concentração de proteína total e suas frações eletroforéticas correlacionando-as com a presença de imunoglobinas no soro de cães com leishmaniose visceral, com e sem acometimento neurológico. Foram utilizados grupos de animais, sendo o primeiro constituído de 18 cães portadores de leishmaniose visceral, sem evidências clínicas de envolvimento neurológico , e o segundo formado por 21 cães portadores de leishmaniose visceral com quadro neurológico. A proteína sérica total foi determinada através do método de biureto e em seguida realizou-se a migração eletroforética para separação das frações protéicas do soro sanguíneo. Ambos os grupos apresentaram uma intensa gamaglobulinemia, uma hipoalbuminemia e uma diminuição da fração alfaglobulina. A elevação dos níveis de gamaglobulina, no grupo controle apresentou uma correlação com uma maior positividade no teste de ELISA no soro destes animais; 88,9 dos cães do grupo controle, contra apenas 28

Presença de anticorpos anti-Neospora caninum e Toxoplasma gondii em cães com leishmaniose visceral da região de Araçatuba, São Paulo, Brasil / Presence of anti-Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniosis from the region of Araçatuba, São Paulo, Brazil

Dogs that had positive and negative sera to Leishmania chagasi from the region of Araçatuba, São Paulo, Brazil, were evaluated for the presence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies as potential co-infecting agents. Blood samples were collected from 204 dogs and out of them 98 were carriers of leishmaniosis. Sera were tested for the presence of anti-L. chagasi antibodies by ELISA, and anti-T. gondii and anti-N. caninum by an indirect fluorescent antibody test (IFAT). Age, gender, and association between the presences of anti-L. chagasi antibodies and seroprevalence to N. caninum and T. gondii were analyzed by chi-square test. Out of the 204 sera investigated, 36 (17.6%) were positive for N. caninum (IFAT=50) and 75 (36.8%) to T. gondii (IFAT=16) with titers that varied from 50 to 6400 for N. caninum, and from 16 to 16384 for T. gondii. The co-presence of anti-L. chagasi, N. caninum and T. gondii antibodies was observed in 17 (8.3%) dogs. Antibodies to N. caninum were observed in four (3.8%) out of 106 dogs that were negative for L. chagasi, and in 32 (32.6%) out of the 98 dogs that were positive for L. chagasi. Anti-T. gondii antibodies were found in 40 (41.0%) and in 35 (33.0%) of the 98 positive dogs and in 106 negative dogs for L. chagasi, respectively. An association between the presence of antibodies against L. chagasi and a positive response to N. caninum (p<0.001) was observed. The gender and age of the dogs did not show an association between the presence of antibodies and any of the agents studied (p>0.05), with the exception of age and presence of anti-L. chagasi antibodies, in which only a slight association was observed (p=0.038). Within this interaction, a higher number of dogs, older than four years, were positive for this agent when compared to other age groups.

Cães soropositivos e soronegativos à Leishmania chagasi da região de Araçatuba, São Paulo, Brasil, foram avaliados quanto à presença de possível co-infecção por Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Amostras de sangue de 204 cães, sendo 98 portadores de leishmaniose, foram coletadas e os soros testados quanto à presença de anticorpos anti-L. chagasi pelo método de ELISA e anti-T. gondii e N. caninum pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Idade, sexo e possíveis associações entre a presença de anticorpos anti-L. chagasi e a soroprevalência de N. caninum e T. gondii foram analisados pelo teste do Qui-quadrado. Dos 204 soros examinados, 36 (17,6%) foram positivos para N. caninum (RIFI ³50) e 75 (36,8%) para T. gondii (RIFI ³16) com títulos que variaram de 50 a 6.400 para N. caninum, e de 16 a 16.384 para T. gondii. A co-presença de anticorpos anti-L. chagasi, N. caninum e T. gondii foi observada em 17 (8,3%) cães. Anticorpos anti- N. caninum foram observados em quatro (3,8%) dos 106 cães negativos e em 32 (32,6%) dos 98 cães positivos à L. chagasi. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 40 (41%) e em 35 (33%) dos 98 cães positivos e dos 106 cães negativos à L. chagasi, respectivamente. Foi observada associação entre a presença de anticorpos anti-L.chagasi e a presença de anticorpos anti-N. caninum (p<0,001). O sexo e a idade dos cães não apresentaram associação com a presença de anticorpos para nenhum dos agentes estudados (p>0,05), com exceção da idade e presença de anticorpos anti-L. chagasi , que apresentou uma associação fraca (p=0,038), com maior número de cães com mais de quatro anos de idade positivos a esse agente quando comparado às outras idades.

Serological diagnosis of visceral leishmaniasis by an enzyme immunoassay using protein A in naturally infected dogs

Um ensaio de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Leishmania chagasi, utilizando antígeno total de formas promastigotas lisados foi desenvolvido. Cinqüenta cães com sintomas clínicos de leishmaniose visceral foram examinados. Esta técnica utilizou anti-IgG de cão conjugado a peroxidase ou proteína A conjugado a peroxidase. Foi verificado que nos animais positivos diagnosticados por exame parasitológico direto o ensaio ELISA utilizando proteína A conjugada a peroxidase (média da densidade óptica ± desvio padrão 2,078 ± 0,631) detecta mais anticorpos do que o sistema utilizando anti-IgG de cão conjugado a peroxidase (média da densidade óptica ± desvio padrão 1,008 ± 0,437), enquanto para os animais negativos o resultado obtido nos dois sistemas de detecção são similares. Esse resultado sugere que o sistema de ELISA utilizando proteína A conjugado a peroxidase pode ser útil na detecção de animais na fase aguda da infecção e desta forma auxiliar na identificação dos animais positivos e no controle desta importante zoonose.